蓝白斑筛选原理简要

简述信息一览：

• 1、蓝白斑筛选的蓝白斑筛选原理
• 2、基因工程中蓝白斑筛选的原理是什么
• 3、蓝白斑筛选的原理是什么?
• 4、简述蓝白斑筛选的原理。
• 5、蓝白筛选pcr的结果

蓝白斑筛选的蓝白斑筛选原理

【答案】： 指利用携带半乳糖苷酶段重组质粒转化对应缺陷型大肠杆菌，产生-半乳糖苷酶可将无色化合物X-gal切割出深蓝色的物质，使菌落产生颜色变化，从而根据颜色变化鉴定和筛选重组子的方法。

是重组子筛选的一种方法，一些载体带有β-半乳糖苷酶N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点，可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时。

这种lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酸阴性突变体之间实现互补的现象叫α-互补。

基因工程中蓝白斑筛选的原理是什么

1、蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法。野生型大肠杆菌（E.Coli）产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。

2、是重组子筛选的一种方法，一些载体带有β-半乳糖苷酶N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点，可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时。

3、设计适用于蓝白斑筛选的基因工程菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌株。这种宿主菌的染色体基因组中编码β-半乳糖苷酶的基因突变，造成其编码的β-半乳糖苷酶失去正常N段一个146个氨基酸的短肽（即α肽链），从而不具有生物活性，即无法作用于X-gal产生蓝色物质。

蓝白斑筛选的原理是什么?

1、如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal，8 μl 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30~60 min 直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。

2、由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

3、是重组子筛选的一种方法，一些载体带有β-半乳糖苷酶N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点，可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时。

4、蓝白斑筛选的原理 分类：生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。

简述蓝白斑筛选的原理。

在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件 （1）首先定义 LacZ：B（beta，打不出来，下同）-半乳糖苷酶 LacZ：含有B-半乳糖苷酶的启动子和5‘端的编码的a肽链。

蓝白斑筛选的原理分类：生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。

能够使得菌落清晰地显示蓝斑或者白斑。在蓝白斑筛选实验中，能够使得菌落清晰地显示蓝斑或者白斑，颜色对比明显，能够清晰辨别出目的菌落。蓝白斑筛选的原理分类生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。

这个是蓝白斑筛选试验。蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。

当培养液中加入IPTG，IPTG可以和乳糖操纵子下游的的阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白从DNA上脱离，激活半乳糖苷酶的表达。因而重组质粒可以利用x-gal而感受态不能。这个是蓝白斑筛选的主要原理。结果中白斑表示重组质粒表达的菌体，蓝斑表示未表达。

蓝白筛选pcr的结果

插入失活法：外源DNA片段插入到位于筛选标记基因（抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因）的多克隆位点后，会造成标记基因失活，表现出转化子相应的抗生素抗性消失或转化子颜色改变，通过这些可以初步鉴定出转化子是重组子或非重组子。常用的是β-半乳糖苷酶显色法即蓝白筛选法（白色菌落是重组质粒）。

然后，你要提取你目标基因可能表达的组织的总RNA，然后将总RNA反转录成为cDNA，接着利用cDNA作为模板，以你设计的引物进行PCR扩增。得到的PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测没有问题后，纯化PCR产物，然后将这个PCR产物连接至T克隆载体上，转化大肠杆菌，进行蓝白筛选以及PCR鉴定。

第二步是筛选出载体-目的基因，在上一步的培养基上挑菌，扩大培养之后，再接种的目的基因的培养基上，从而筛选出阳性克隆就可以了（这一步常用的、比较简单的方法就是蓝白板的筛选）。所以即使有载体-载体的连接物，也是会被在第二步筛选掉得。

pMD19-T Vector是线性的，必须是3段有A的目的基因片段才可以和pMD19-T Vector连接。另外pMD19-T simple是指消除了pUC19载体上的多克隆酶切位点，由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。

关于蓝白斑筛选机制简单，以及蓝白斑筛选原理简要的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。