蓝白斑筛选原理及操作过程

本篇文章给大家分享蓝白斑筛选机制，以及蓝白斑筛选原理及操作过程对应的知识点，希望对各位有所帮助。

简述信息一览：

• 1、简述α互补和蓝白斑筛选的原理
• 2、基因克隆
• 3、求与克隆有关的英语单词
• 4、蓝白斑筛选

简述α互补和蓝白斑筛选的原理

重组质粒转化宿主细胞后，还需对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用的一种鉴定方法。现在使用的许多载体都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其α肽链的DNA序列，此结构称为lac Z′基因。Lac Z′基因编码的α肽链是β半乳糖苷酶的氨基端的短片段（146个氨基酸）。

蓝白斑筛选的原理 分类：生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。

由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

基因克隆

1、基因克隆即重组DNA技术，指在体外对DNA分子按照既定的目的和方案，***用酶学方法，将不同来源的DNA分子在体外剪切和重新连接，组装成一个新的DNA分子。在此基础上，将这个DNA分子导入到一定的宿主细胞，使它能够在宿主细胞中扩增，形成大量的子代分子，此过程即称为基因克隆。

2、【答案】：（1）RACE技术 基本原理：根据已知序列设计基因片段内部特异引物，由该片段向外侧进行PCR扩增得到目的序列。用于扩增5端的方法称为5RACE，用于扩增3端的称为3RACE。用途：是用于从已知cDNA片段扩增全长基因的方法。

3、cDNA差示分析法：此法通过PCR技术特异性扩增目的基因片段，通过减少cDNA的复杂性并改变接头序列来实现。通过特定的酶处理和参数设置，确保高纯度的产物和探针。此法用于补充其他克隆技术。（3）Gateway大规模克隆技术：基于位点特异性DNA片段重组，通过整合与切出反应，实现基因的快速克隆和平行转移。

4、【答案】：基因克隆的概念：应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成具有自我***能力的***子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增，提取获得大量同一DNA分子的过程。

求与克隆有关的英语单词

1、关于克隆的设想，我国明代的大作家吴承恩已有精彩的描述——孙悟空经常在紧要关头拔一把猴毛变出一大群猴子，猴毛变猴就是克隆猴。

2、克隆是英语单词clone的音译，clone源于希腊文klone，原意是指幼苗或嫩枝，以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物，如杆插和嫁接。如今，克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。

3、知道小有建树答主 回答量：247 ***纳率：100% 帮助的人：292万 我也去答题访问个人页 关注 展开全部 什么是克隆？ 克隆是英语单词clone的音译，clone源于希腊文klone，原意是指幼苗或嫩枝，以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物，如杆插和嫁接。

蓝白斑筛选

1、蓝白斑筛选技术利用了一种名为α-互补的原理，其核心是载体上带有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）调控序列和编码N端146个氨基酸的序列。这个区域设计巧妙，包含一个多克隆位点，但不会干扰lacZ的正常功能。E. 袁coli DH5α菌株则带有编码β-半乳糖苷酶C端部分的序列。

2、蓝白斑筛选是一种基因工程常用的重组菌筛选方法。野生型大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。有色物质可以使整个培养菌落产生颜色变化，而颜色变化是鉴定和筛选的最直观有效的方法。

3、蓝斑。蓝白斑筛选是一种根据菌落颜色筛选重组子的方法，用于从细菌中筛选质粒，是通过在含有X-Gal-IPTG的LA培养基中，观察菌落颜色来筛选白色菌落中含有的重组子质粒，同时丢弃含有野生型质粒的蓝色菌落，所以挑选蓝斑。

4、在该筛选方法中重组体和空载体的颜色分别是白色和蓝色。在蓝白斑筛选中，使用的培养基含有X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷），这是一种可以被β-半乳糖苷酶切割的底物，切割后会产生深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝，使菌落呈现蓝色。

5、蓝白斑筛选的机理 由α-互补产生的Lac+ 细菌较易识别，它在生色底物X-gal（5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）下存在下被IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）诱导形成蓝色菌落。

6、选择正确的斑点：在开始蓝白斑筛选之前，第一步就是选择正确的斑点，这些斑点会最大化图案细节，使其更加清晰。调整斑点大小：在确定斑点位置后，接下来就要调整斑点的大小，以使图案更加清楚可见。调整斑点强度：根据需要，可以调整斑点的强度，以突出图案中的重要信息。

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